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流式細胞分選抗體的常規處理方法
更新時(shí)間:2022-06-20 點(diǎn)擊量:
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流式細胞分選是指將組織分散制成細胞懸液后從中獲取目的細胞的過(guò)程。細胞純化更進(jìn)一步強調從原代培養前成分混雜的異質(zhì)性細胞懸液中或者從培養物中獲得單一類(lèi)型細胞的過(guò)程。通過(guò)細胞的分離和純化過(guò)程,使培養物成為單一類(lèi)型培養物,甚至是遺傳特性*一致的培養物,后者即細胞系。許多情況下,細胞分離和純化并不是**的,培養物中只能達到以某種細胞為主的程度,所以也成稱(chēng)為富集。
分離和純化細胞的過(guò)程不僅僅在原代培養之前進(jìn)行的,有時(shí)分離和純化細胞的過(guò)程還貫穿于原代培養和繼代培養的過(guò)程中,甚至是主要依賴(lài)培養過(guò)程實(shí)現分離和純化細胞的目的。培養物中細胞成分是否單一或者目的細胞在培養物中的比例如何,常是衡量某一培養工作是否成功的重要指標。細胞分離純化的方法有密度梯度離心技術(shù)、逆流淘析分離技術(shù)、利用細胞表面標志分離純化細胞的方法等。
流式細胞分選抗體的常規處理方法:
1、分選外周血,骨髓時(shí):加抗凝劑,去紅細胞;
2、分選組織時(shí),機械分離或膠原酶;
3、培養細胞,使用胰酶消化。
在實(shí)際細胞分離中,因為流式分選的辦法價(jià)格相對比較昂貴,實(shí)驗者一般都會(huì )采取別的方法分離細胞。下面列出來(lái)幾種其它細胞分離方法不能替代的情況,這些情況下必須進(jìn)行流式的細胞分選:
1、要求目標細胞群有*的純度(95%-100%);
2、需要分離低密度表面受體/抗原的細胞;(弱陽(yáng)性細胞);
3、需要根據表面受體密度的差別來(lái)分離不同細胞;(根據免疫表型的分選,抗體親和力進(jìn)化等);
4、需要依據多色熒光標記來(lái)分選細胞;
5、根據某些細胞內部標志,如DNA含量、胞內抗原等分離細胞;
6、多孔板分選。如單克隆分選,在96孔板每個(gè)孔中精確的分選進(jìn)1個(gè)細胞;
7、需要分選極低含量的細胞(如0.001%或更低)。流式可以分選出百萬(wàn)分之一的稀有細胞。
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