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PCR/qPCR耗材選擇——材料及顏色篇

 更新時(shí)間:2023-02-13    點(diǎn)擊量:1178

目前市場(chǎng)上大多數PCR/qPCR管材選用的是聚丙烯材料。聚丙烯是一種惰性的有機材料,對反應物質(zhì)的吸收值最小,并且聚丙烯可以承受PCR過(guò)程中的溫度變化,在經(jīng)過(guò)溫度變化后不易變形,因此可以確保獲得最佳的PCR結果。

在生產(chǎn)過(guò)程中,為了保證生物兼容性、純度以及批次間的一致性,應當使用全新的醫學(xué)級的分子生物學(xué)級別的高品質(zhì)的聚丙烯作為原料進(jìn)行生產(chǎn)。有些PCR / qPCR板為了配合高通量機器人的操作,需要具有更高強度的邊框來(lái)配合機器人的抓取,通常情況下邊框的材料使用的是更高強度的聚碳酸酯。

在某些PCR過(guò)程中,如數字PCR,對于耗材的選擇更為嚴苛。由于數字PCR使用的是有限稀釋檢測法,因此在操作配樣的過(guò)程中如果樣品吸附在槍頭或管壁上,將會(huì )造成樣本的缺失,從而造成結果的偏差。對于樣本稀缺且珍貴的實(shí)驗中,低吸附度的耗材可以減少材料的損耗,并且可以保證PCR實(shí)驗的準確性。因此低吸附度的耗材贏(yíng)得了研究學(xué)者的青睞。

PCR/板有多種顏色,如透明色、白色、黃色、藍色、紅色……普通的PCR過(guò)程中,管/板的顏色并不會(huì )影響PCR的結果,但是在qPCR中,管/板的顏色對于結果是有很大的影響的。

應用于qPCR的耗材,一般是白色或者磨砂的塑料耗材。qPCRDNA擴增反應中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次PCR循環(huán)后產(chǎn)物總量,因此與透明塑料管/板相比,白色或磨砂的管/板在應對熒光時(shí)表現更為靈敏,并且結果更加準確。這是因為白色的耗材可以阻止熒光折射出管,達到熒光折射的最小化,將更多的熒光信號反射回檢測器,從而增加信噪比,表現為更高的靈敏度;另外,白色管壁也可阻止熒光信號被PCR儀的加熱模塊吸收或進(jìn)一步反射,從而可以降低重復實(shí)驗中的誤差,提高準確性。除此之外,在進(jìn)行qPCR時(shí)需使用超透明的管蓋或光學(xué)密封膜來(lái)密封PCR/板,保證熒光不受干擾;還需要參考qPCR的耗材要求,選擇最合適的耗材,達到想要的實(shí)驗效果。


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