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什么是熒光原位雜交？

　更新時(shí)間：2023-08-23 點(diǎn)擊量：641

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門(mén)新興的分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是 20 世紀 80 年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應用于動(dòng)植物基因組結構研究、染色體精細結構變異分析、病毒感染分析、人類(lèi)產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于 DNA 分子在染色體上是沿著(zhù)染色體縱軸呈線(xiàn)性排列，因而可以探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統的放射性標記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn)，因此在分子細胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。

雜交所用的探針大致可以分類(lèi)三類(lèi)：

1）染色體特異重復序列探針，例如 α 衛星、衛星 III類(lèi)的探針，其雜交靶位常大于 1Mb，不含散在重復序列，與靶位結合緊密，雜交信號強，易于檢測；

2）全染色體或染色體區域特異性探針，其由一條染色體或染色體上某一區段上極duan不同的核苷酸片段所組成，可由克隆到噬菌體和質(zhì)粒中的染色體特異大片段獲得；

3）特異性位置探針，由一個(gè)或幾個(gè)克隆序列組成。

探針的熒光素標記可以采用直接和間接標記的方法。間接標記是采用生物素標記DNA探針，雜交之后用藕聯(lián)有熒光素親和素或者鏈霉親和素進(jìn)行檢測，同時(shí)還可以利用親和素-生物素-熒光素復合物，將熒光信號進(jìn)行放大，從而可以檢測 500bp 的片段。而直接標記法是將熒光素直接與探針核苷酸或磷酸戊糖骨架共價(jià)結合，或在缺口平移法標記探針時(shí)將熒光素核苷三磷酸摻入。直接標記法在檢測時(shí)步驟簡(jiǎn)單，但由于不能進(jìn)行信號放大，因此靈敏度不如間接標記的方法。

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