聚合酶鏈式反應(PCR)是基因工程中常用的一種分子生物學(xué)技術(shù),PCR管通過(guò)模擬體內DNA復制過(guò)程快速合成特定DNA片段。其原理基于DNA的復制過(guò)程,包括三個(gè)步驟:變性、退火和延伸。
變性(Denaturation)階段,反應體系中的DNA雙鏈結構在高溫(通常為94°C-98°C)下被分離成兩條單鏈DNA。這一步是通過(guò)加熱使兩條DNA鏈斷裂,目的是將DNA的雙鏈結構變?yōu)閱捂溄Y構以提供模板。
退火(Annealing)階段,溫度被降低至50°C-65°C,此時(shí)引物(Primers)能夠與目標DNA序列的互補區域結合,因為引物與目標DNA序列的堿基配對具有特異性。引物的選擇是PCR反應設計中重要的一環(huán),其長(cháng)度一般為18-30個(gè)堿基,并且具有雙鏈DNA穩定結構。引物的位置決定了擴增片段的大小。
延伸(Extension)階段,延伸溫度一般設定在72°C,本階段需要一種特殊的酶——DNA聚合酶(DNApolymerase)。在該酶的催化下,引物結合至目標DNA上時(shí),DNA聚合酶會(huì )從引物的3’端開(kāi)始合成新的DNA鏈,直到達到目標DNA的3’端為止。該酶使用反應體系中的四種核苷酸(dNTPs)作為合成材料,并且能夠識別引物與DNA模板的堿基配對,使目標DNA的兩條鏈都得到復制。
PCR管的維護保養方法:
1.使用前檢查完整性,確保沒(méi)有破損或污染。
2.避免將暴露在強光下,以免對PCR反應產(chǎn)生干擾。
3.存放時(shí),應避免存放在高溫或陽(yáng)光直射的地方。
4.使用塑料架或托盤(pán)來(lái)保護,避免直接接觸硬表面,防止破損。
5.在退出蓋前,確保已經(jīng)降溫,以避免熱氣壓的影響導致樣品飛濺。
6.定期檢查標記是否清晰可讀,如有磨損或模糊應及時(shí)更換。
7.避免使用廢舊,以免可能存在的殘留對實(shí)驗結果產(chǎn)生干擾。