細胞復蘇是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養，細胞恢復生長(cháng)的過(guò)程。當恢復到常溫狀態(tài)時(shí)，細胞的形態(tài)結構保持正常，生化反即刻恢復。細胞復蘇過(guò)程升溫要快，原則是慢凍快融，防止在解凍過(guò)程中水分進(jìn)入細胞，形成冰晶，影響細胞存活。下面讓我們一起來(lái)看看細胞復蘇實(shí)驗的操作步驟與注意事項吧！
 

　　一、操作步驟
 

　　1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；
 

　　2.預熱培養基；
 

　　3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；
 

　　4.將凍存細胞從液氮罐中取出；
 

　　5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；
 

　　6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；
 

　　7.吸取9ml培養基到50ml離心管中；
 

　　8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；
 

　　9.1000r/min,離心5min；
 

　　10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；
 

　　11.吸棄上清液；
 

　　12.吸取1ml培養基重懸細胞，將細胞懸液轉移到培養瓶?jì)龋a加適量培養基，輕輕晃動(dòng)培養瓶使細胞分布均勻，并做好標記；
 

　　13.在顯微鏡下觀(guān)察復蘇的細胞密度及狀態(tài)；
 

　　14.將細胞放回二氧化碳培養箱中靜置培養。
 

　　二、注意事項
 

　　1.從液氮罐中取出細胞時(shí)，應做好個(gè)人防護以免凍傷；
 

　　2.凍存細胞取出后，如不能立即放入水浴鍋中融化，需將其放在干冰上保存轉移；
 

　　3.細胞水浴解凍時(shí)間以1min內為宜，做到慢凍速融；
 

　　4.已解凍的細胞避免長(cháng)時(shí)間常溫存放，需盡快離心去除DMSO；
 

　　5.剛復蘇的細胞貼壁尚不牢固，24h內不要頻繁觀(guān)察和換液；
 

　　6.將培養瓶放入培養箱，并將瓶蓋旋松，以便進(jìn)行充分的氣體交換(如使用透氣性瓶蓋，則無(wú)需旋松瓶蓋)。
 

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