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瞬時(shí)轉染和穩定轉染常見(jiàn)誤區

 更新時(shí)間:2024-11-12    點(diǎn)擊量:37
  誤區一:穩定轉染目的基因會(huì )整合到染色體,瞬時(shí)轉染不會(huì )
 
  這個(gè)答案是否定的,因為無(wú)論是瞬時(shí)轉染還是穩定轉染,DNA都會(huì )被引入細胞核并以一定的概率隨機地整合到宿主染色體;差別在于,穩定轉染所使用的質(zhì)粒含有抗性基因,隨后通過(guò)藥物篩選,將未轉入目的基因的細胞消除,留下的則是成功轉入目的基因的細胞,因此經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的藥物篩選,留存下來(lái)的細胞都是能夠穩定傳遞的細胞,稱(chēng)之為穩定轉染;而瞬時(shí)轉染由于缺乏藥物壓力篩選,再加上只有少量細胞中有目的基因整合到染色體,因此在傳代過(guò)程中,陽(yáng)性細胞會(huì )逐漸減少,導致表達量逐漸降低,最終無(wú)法長(cháng)期穩定表達。
 
  誤區二:只有慢病毒感染才能構建穩轉細胞株
 
  可以用來(lái)進(jìn)行快速轉染的轉染方法,同樣適用于構建穩定的細胞株,例如電穿孔法、化學(xué)試劑轉染和慢病毒感染等。只是這三種轉染方法在具體應用上可能會(huì )有一些差異。需要特別注意的是,在進(jìn)行RNA轉染時(shí),由于RNA不需要進(jìn)入細胞核,因此通常只用于短期轉染表達。
 
  誤區三:構建穩轉細胞株費時(shí)費力,周期長(cháng),不確定性高,常規實(shí)驗室不方便構建
 
  細胞株構建需要通過(guò)藥物加壓篩選,與瞬轉相比周期長(cháng),但在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí),確定了一個(gè)長(cháng)期研究的靶標,后續都會(huì )針對某一基因進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗,那么這個(gè)時(shí)候構建穩轉細胞株就顯得尤為必要,畢竟細胞株相較于瞬轉來(lái)說(shuō),最大的優(yōu)點(diǎn)就是表達穩定性高,批間差異小,實(shí)驗結果可靠性更高。
 
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