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022-66387942簡(jiǎn)要描述:CHO細胞專(zhuān)用轉染試劑盒——PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit,用于CHO細胞的高密度無(wú)血清懸浮培養、DNA 瞬時(shí)轉染及蛋白表達。
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介
CHO細胞專(zhuān)用轉染試劑盒——PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit,是一款高效經(jīng)濟的核酸轉染試劑,專(zhuān)門(mén)用于在CHO懸浮細胞進(jìn)行重 組蛋白生產(chǎn)的試劑盒,包含轉染試劑、稀釋液、無(wú)血清培養基、補料、增強劑等組分,具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜、 蛋白產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)。
PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit適用范圍:CHO細胞的高密度無(wú)血清懸浮培養、DNA 瞬時(shí)轉染及蛋白表達。
二、實(shí)驗操作流程
1.細胞接種(以25mL體系為例):
根據細胞狀態(tài),選擇合適的接種密度,建議接種密度為2.5~3×106 cells/mL,待第二天細胞密度達到6×106 cells/mL左右,活性大于95%時(shí)進(jìn)行轉染。
2.瞬時(shí)轉染:
建議質(zhì)粒(μg)與試劑(μL)參考配比區間為1:2~1:4之間。具體步驟如圖1所示(以1:3為例):
(1)使用本樣品前渦旋混勻5秒,使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀釋75 μL的轉染試劑,并吹打均勻;
(2)使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀釋25 μg質(zhì)粒,并吹打混勻;
(3)將(1)和(2)所述溶液混合均勻;
(4)將(3)所述混合溶液室溫靜置孵育10~15 min;
(5)將(4)中的復合物溶液加入25 mL的細胞培養體系中,放回搖床中,在37 ℃、震蕩速度120 rpm下繼續培養。
3.產(chǎn)物表達與檢測:
(1)轉染24小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)、168小時(shí)后加入3%(0.75 mL/25 mL)PolyTool™ CHO S1補料、0.3%(75 μL/25 mL)PolyTool™ CHO S2補料。
若想獲得高表達效果,24 小時(shí)添加完補料后,將細胞轉移至32℃搖床培養箱中進(jìn)行低溫表達(葡萄糖控制在 4~8 g/L)。
(2)轉染后第 6~8 天測定產(chǎn)物表達量。大多數蛋白的合成在轉染后第7天左右可達到最高值,客戶(hù)可根據細胞狀態(tài)及表達量選擇適宜的收獲時(shí)間。
圖1 細胞轉染示意圖
CHO細胞專(zhuān)用轉染試劑盒PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit代理——天津益元利康生物科技有限公司,成立于2018年,坐落于天津經(jīng)濟技術(shù)開(kāi)發(fā)區。公司產(chǎn)品線(xiàn)涉及細胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)等多個(gè)方向,專(zhuān)注于生命科學(xué)試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷(xiāo)售,經(jīng)營(yíng)的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù),努力成長(cháng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應商。