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022-66387942簡(jiǎn)要描述:BrainBits小鼠全腦培養試劑盒,包含從新鮮組織開(kāi)始培養所需的一切。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲存介質(zhì)運送。
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介
BrainBits小鼠全腦培養試劑盒,提供完整的培養服務(wù),包含從新鮮組織開(kāi)始培養所需的一切。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲存介質(zhì)運送。立即使用組織能獲得最高的細胞產(chǎn)量,但注意組織可在4-8°C下保存一周。這個(gè)試劑盒是研究人員為下一代研究人員提供剛剛開(kāi)始的可能性的實(shí)踐方法,十分適用于科研。
★產(chǎn)品組分:1 E18小鼠全腦、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1個(gè)帶橡膠球的火拋光移液、1對PDL涂層蓋板。
二、產(chǎn)品使用
(一)制劑(無(wú)菌罩室溫)
1. 將6mg無(wú)菌木瓜蛋白酶(PAP 6mg)溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中,制備細胞解離液,最終工作濃度為
2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分鐘使其溶解。放入冰箱或冰中備用。組織和木瓜蛋白酶必須處于相同的溫度
(根據處理組織的數量,可能需要幾個(gè)單位)。
2. 將80µl臺普蘭藍(Sigma T8154)加入0.5ml試管中進(jìn)行第9步。
(二)細胞分散(無(wú)菌罩室溫):
1. 用2ml移液管,用最少的培養基小心地將組織轉移到木瓜蛋白酶上。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個(gè)新的無(wú)菌15ml試管中
保存到步驟3。
2. 組織與木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分鐘。輕輕地旋轉每2分鐘或使用加熱搖振板在30℃和150rpm。
3. 用2ml移液管從木瓜蛋白酶中除去帶有少量培養基的組織,并從步驟1中返回THRYVE胚胎wanquan培養基。
4. 使用硅化巴斯德移液器,將組織分散不超過(guò)10倍或90%,避免產(chǎn)生氣泡。可選:加入400µl 1mg/ml DNase I溶液(StemCell Technologies 07469)加入細胞漿液中,在室溫下孵育15分鐘,輕彈或旋轉。
5. 讓未分散的碎片靜置1分鐘。
6. 將含有分散細胞的上清液轉移到15ml無(wú)菌管中。留下約50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan體。可選用70µm濾池過(guò)濾細胞液。
7. 旋轉1100rpm (200 x G) 1分鐘。丟棄上清,留下含有微球的約50μl THRYVE胚胎wanquan液。
8. 分散細胞顆粒(用手指或管輕彈管底部),重懸于1ml NbActiv1™中。
9. 取20μl細胞液加入含有80μl臺盼藍(1:5稀釋?zhuān)┑?/span>0.5ml試管中,或按實(shí)驗室現行計數程序計數。
10. 使用血細胞計(計算細胞/ml)或使用當前的實(shí)驗室程序計數細胞。
(三)細胞電鍍(無(wú)菌罩室溫):
1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細胞,并以16,000個(gè)細胞/cm2或所需濃度進(jìn)行板載。
2. 37℃,5% CO2, 9% O2, 95%濕度(或環(huán)境O2)孵育。
3. 4天后,神經(jīng)元顯示軸突和樹(shù)突;突觸和動(dòng)作電位開(kāi)始于7天。
4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養基。
(四)可行性分析:
1. 用37℃HBSS (0.2ml/cm2底物)沖洗兩次。
2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物,各稀釋15µl,加入1.5ml HBSS(1:100稀釋?zhuān)?/span>
3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物(1:10稀釋?zhuān)?/span>
4. 約1分鐘后,使用適合熒光素熒光的藍色激勵(綠色細胞)計數活細胞。用綠色激勵計數死細胞碘化丙啶熒光(小紅核)。
5. 生存能力=(綠色細胞/單位面積)/(總細胞數/單位面積)或生存=綠色細胞/(綠色+紅色細胞)。
三、產(chǎn)品目錄表
SKU | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品品牌 |
KTC57EWB | 小鼠全腦培養試劑盒 | Transnetyx Tissue BrainBits |
三、代理簡(jiǎn)介
BrainBits小鼠全腦培養試劑盒——天津益元利康生物科技有限公司,成立于2018年,坐落于天津經(jīng)濟技術(shù)開(kāi)發(fā)區。公司產(chǎn)品線(xiàn)涉及細胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)等多個(gè)方向,專(zhuān)注于生命科學(xué)試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷(xiāo)售,經(jīng)營(yíng)的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù),努力成長(cháng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應商。