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上文介紹了流式細胞術(shù)的原理及應用，今天讓我們學(xué)習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標記：根據抗體說(shuō)明書(shū)標記實(shí)驗管。混勻后，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過(guò)濾，避光等待上機檢測。二、儀...

流式細胞儀在手，卻不知道原理？快來(lái)看看這篇文章吧！一、流式細胞術(shù)實(shí)驗原理流式細胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種單細胞定量分析技術(shù)，該技術(shù)通過(guò)測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數，可以定量分析細胞的結構特征（如DNA含量、蛋白、細胞膜、胞漿或胞核抗原表達量）和功能特征（如細胞內酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數，進(jìn)行細胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細胞分離并計數，將感興趣的細胞分選出來(lái)，提供分類(lèi)比例并進(jìn)行進(jìn)一步分析。二、流式細胞技術(shù)應用1...

一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設計引物和探針?：首先需要根據目標DNA序列設計特異性引物和探針。引物的長(cháng)度一般為20-25個(gè)核苷酸，探針的長(cháng)度一般為15-25個(gè)核苷酸。設計時(shí)要注意避免非特異性擴增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測樣本中提取DNA，作為PCR反應的模板。確保模板DNA的質(zhì)量和濃度，以獲得可靠的實(shí)驗結果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應體系?：根據實(shí)驗需求，配制含有引...

?免疫組化（IHC）實(shí)驗中出現假陽(yáng)性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽(yáng)性的處理1.?降低一抗濃度?：通過(guò)降低一抗的濃度，可以減少非特異性結合，從而降低假陽(yáng)性。通常，降低濃度至能看到陽(yáng)性表達且能明顯區分陽(yáng)性區域與周?chē)g質(zhì)即可?。2.?調整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對于動(dòng)物標本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應引...

常見(jiàn)核酸提取純化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分離技術(shù)、離心柱純化法等，今天我們來(lái)看下離心柱法的實(shí)驗步驟和優(yōu)缺點(diǎn)吧~一、離心柱法提取DNA步驟離心柱法提取DNA步驟一將組織或細胞懸液加入裂解緩沖液，渦旋混勻。裂解緩沖液中含有變性劑（如胍異硫氰酸鹽），可以有效地裂解細胞和組織，破壞細胞膜和細胞核膜，同時(shí)使核酸與蛋白質(zhì)分離。離心柱法提取DNA步驟二將裂解液轉移到DNASpinColumn中，離心收集流穿液。這個(gè)步驟涉及到將裂解液通過(guò)一個(gè)特殊的膜過(guò)濾，該膜具有特定的孔徑，允許小分子...